石墨炉原子吸收光谱法测定人全血中铅含量

 关键词:石墨炉原子吸收光谱法;血液;铅;硝酸;美析集团 www.macylab.com;AA1800

  血铅是铅接触首选检测指标，主要反映近期铅接触量和软组织中的铅含量，是目前临床上儿童及成人铅中毒的诊断指标。我国在2018年颁布《血中铅的测定》(GBZ/T316.1—2018)国家标准方法，并于2019年1月1日实施。此方法中血液样品的前处理需要使用硝酸，而硝酸作为易制爆化学品，按照《剧毒、易制爆化学品、放射源存放场所治安防范要求》规定，在购买、存放、使用等方面均有严格的管理制度，为临床工作增加很多困难，且极大地提高了检测成本。为此，本研究旨在不使用硝酸的前提下，建立一种准确可靠、易推广的血铅含量检测方法。

一、材料与方法

1.1仪器与试剂

石墨炉原子吸收光谱仪（美析集团 www.macylab.com），

旋涡振荡器，

超纯水系统，

肝素锂真空采血管，

超纯水，

硝酸钯1000mg/L，

血铅质控样品(挪威Seronorm，TraceElementWholeBloodL-1/L-2，1406263/1406264)，

铅单元素标准溶液(1000μg/ml，国家有色金属及电子材料分析测试中心，173026-1)。

1.2方法

1.2.1样品处理

将样品放至室温并充分混匀后，取0.1ml血样、0.9ml0.1%曲拉通溶液于1.5ml具盖塑料离心管中，旋涡振荡器混匀后，以体积比10%硝酸钯溶液作为基体改进剂，上机测定。

1.2.2铅标准曲线的配制取铅标准液(1000μg/ml)1ml，在100ml容量瓶中以纯水定容至刻度，配制成10μg/ml的铅标准中间液;再取铅标准中间液1ml，μg/L;

二、结果

2.1线性范围铅浓度在0.06～80μg/L线性良好，线性方程为Y=0.00203X－0.00338，Ｒ²=0.9995(X为铅浓度，Y为吸光度值)。方法检出限0.06μg/L，在100ml容量瓶中以0.1%曲拉通溶液定容至刻度，配制成100μg/L的铅标准应用液;分别取铅标准应用液0、0.1、0.2、0.4、0.8ml，以0.1%曲拉通溶液定容至0.9ml，再分别加入0.1ml低本底人血(含铅量小于定量下限)，配制成0、10、20、40、80 g/L铅标准系列。

1.2.3测定条件

波长283.3nm，灯电流10mA，狭缝0.7nm，石墨炉具体条件设置见表1。

1.2.4计算

C=10c0

C—样品中铅的浓度，μg/L;

c0—由回归方程计算所得样品溶液中铅的浓度，

定量下限0.21μg/L(以20μl进样量计)。

2.2精密度实验

2.2.1批内精密度

取高铅含量血样(约400μg/L)和低铅含量血样(约10μg/L)各1支，按上述方法处理后上机测定，每个样品重复测定7次，经计算批内精密度为0.9%、2.5%。

2.2.2批间精密度

取高铅含量血样(约400μg/L)和低铅含量血样(约10μg/L)各1支，按上述方法重复6次预处理和测定，经计算批间精密度为1.1%、2.9%。

2.3准确度实验

2.3.1加标回收率

选择血铅浓度为203.2μg/L的血样，加入本底浓度约0.5倍和1倍浓度的铅。加标回收率结果见表2。

2.3.2质量控制

样品测定全血质控样品L1(质控范围7.9～11.9μg/L)和全血质控样品L2(质控范围269～405μg/L)各1支，按1.2.1进行处理后上机测定，测定结果L1为10.2μg/L、L2为335.9μg/L。

2.4稳定性实验

将铅接触者的新鲜血液样品分成4组，每组6份，储存于4℃冰箱中，分别在第1天、第3天、1周、2周后各分析一组，后三组测定均值与第1天测定均值相比较，计算相对偏差，结果分别为2.3%、3.9%、16.2%，表明血液样品在4℃冰箱中可以放置保存7d。

2.5抗干扰实验

分别向同一份血液样品中加入高于中毒诊断值或正常参考值数倍的较为常见的重金属或非金属毒物，本实验选择汞、砷、铜、镉4种元素，每种元素设6个平行样品，测定结果经统计分析表明其对铅含量的测定并无显著影响。见表3。

2.6方法比对

实验随机取100份人血液样品，采用国家标准方法、本实验方法分别进行检测，血铅几何均值结果分别为217.8、225.1μg/L，两种方法测定结果的差异无统计学意义(t=0.626，P=0.382)。

三、讨论

3.1石墨炉条件设置

3.1.1预灰化石墨炉原子吸收法测定全血中铅含量经常使用硝酸脱蛋白，其作用是将血液中的绝大部分有机物沉淀分离，能较好地去除基体干扰;缺点是酸度会影响石墨管的使用寿命。不加硝酸直接稀释则易导致石墨管积碳严重，基体干扰较大，而影响测定结果。本研究在石墨炉条件设置中，在灰化阶段前加入一步“预灰化”程序(见表1步骤3)，即通入空气增加氧化环节，以起到除碳作用。

3.1.2灰化温度选择

按上述仪器条件及样品处理方法，在其它条件固定的情况下，灰化温度在700～1100℃范围内，测定含铅量约400μg/L的血液样品。结果表明，1000℃时吸光度响应值最大，略高于900℃，但900℃时背景吸收较低且峰型更好，综合考虑选择900℃。见图1。

3.1.3原子化温度的选择

按上述仪器条件及样品处理方法，在其它条件固定的情况下，原子化温度在1400～1800℃范围内，测定含铅量约400μg/L的血液样品。结果表明，1600℃时吸光度响应值最大。

背景吸收低且峰型好，故选择1600℃，见图2。

3.2样品稀释液的选择

TritonX-100作为一种表面活性剂可以溶解脂质，破坏细胞膜，有利于细胞充分破裂溶解出铅，并使样品呈稳定的均相状态，易于灰化，使背景信号值降低，有利于检测［4］。

3.3基体改进剂的选择

在石墨炉原子吸收分析中，常用基体改进剂有磷酸二氢铵、硝酸钯、硝酸镁等。金属钯是中国科学家在国际上首先提出的一种通用基体改进剂。在铅元素检测的灰化阶段与之形成非常牢固的共价键使其能够承受更高的灰化温度。本研究按上述仪器条件及样品处理方法，分别以磷酸二氢铵、硝酸钯、硝酸镁做基体改进剂，结果显示，在相同条件下以硝酸钯做基体改进剂时峰型好且响应值高，背景干扰小。

实验结果表明，本方法不使用硝酸，仅用0.1%曲拉通溶液稀释血液10倍，以10%硝酸钯溶液做基体改进剂，样品处理步骤简单快速，方法检出限和定量下限低、准确度较高，精密度好，适用于人全血铅含量的测定

四、文献出处及鸣谢
本文主要内容部分出自：1.石墨炉原子吸收光谱法测定人全血中铅含量；王凯，庞妍，张瑶瑶                          

                              中图分类号:Ｒ135.11文献标识码:B文章编号:1002－221X(2020)05－0461－03；DOI:10.13631/j.cnki.zggyyx.2020.05.024