紫外-可见分光光度法测定赣南风车子中总黄酮的含量

风车子（Combretum alfredii hance）为使君子科风车子属植物，别名水番桃、清凉树、华风车子、四角风，分布于江西、湖南、广东、广西等地 。风车子属植物的根、茎、叶、花和种子均可入药，在不同地区被当作民间药广泛用于治疗肝炎、痢疾、呼吸道感染甚至癌症。现代药理研究表明该属植物具有保肝、抗炎、杀菌、抗癌和抗艾滋病等作用 ，其化学成分主要以二苯乙烯类、三萜化合物及菲类化合物为主，此外还有大环内酯类、黄酮类、脂肪酸类、生物碱类和甾体类化合物等。

黄酮类成分可能是风车子属植物的主要药效成分之一，但目前对风车子黄酮类化合物的研究相对较少，本论文拟用紫外可见分光光度法测定风车子中总黄酮的含量，建立风车子总黄酮含量比色测定的方法，为风车子的进一步开发利用奠定理论基础。

仪器与试剂

高速万能粉碎机，

十万分之一电子天平，

数控超声波清洗器，

紫外 - 可见分光光度计（UV1500，上海美析仪器有限公司），

旋转蒸发仪，

超纯水系统。

芦丁对照品（中国食品药品检定研究院，批号 ：100080-201610），

 超 纯 水（自制 ），

乙 醇、NaNO2、Al(NO3)3、NaOH 等试剂均为分析纯。

风车子（市售）经赣南医学院彭金年副教授鉴定为使君子科风车子属植物风车子（Combretum alfredii hance）。

方法与结果

对照品溶液制备

精密称取105 ℃干燥至恒重的芦丁对照品20 mg，用60 % 乙醇溶解定容至100 mL，配制成0.2 mg/mL的芦丁对照品溶液。

供试品溶液制备

将风车子60 ℃烘干，用高速万能粉碎机粉碎，过40目药筛。精密称取1.000 g，置于250 mL 圆底烧瓶中，加入60% 乙醇后，置于超声波清洗机中进行提取（料液比1:34，提取时间60分钟 ），抽滤，滤渣同法再提取2次，合并滤液，用旋转蒸发仪浓缩至适量，转移至50 mL 容量瓶，以60% 的乙醇定容至刻度，得风车子供试品溶液。

标准曲线绘制

精密吸取芦丁对照品溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10 mL，分别置于50 mL 容量瓶中，各加60% 乙醇溶液至12 mL，分别加入5% 亚硝酸钠溶液2 mL，摇匀，放置6 min，加入10% 硝酸铝溶液2 mL，摇匀后放置6 min，加入 4% 氢氧化钠溶液 20 mL，摇匀后放置5 min，加60% 乙醇溶液至刻度，摇匀后放置15 min。

测量波长的确定 ：以未加芦丁对照品溶液的第1瓶溶液作空白，对加入8.0 mL 芦丁对照品溶液的第5瓶溶液在350~600 nm 范围内进行光谱扫描，得芦丁对照品显色后的吸收曲线 ；同法对风车子供试品溶液适量显色处理后扫描，得到风车子样品显色后的吸收曲线，结果见图1。对比芦丁对照品和风车子样品的吸收曲线，选择508 nm 为定量测量波长 。

以未加芦丁对照品溶液的第1瓶溶液作空白，在定量波长508nm处测定各溶液的吸光度，以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，线性拟合得回归方程

y=8.652x-8.524E^-4（R²=0.9986），线性范围0.008~0.040 mg/mL，见图2。

风车子总黄酮含量测定

取风车子供试品溶液0.5 mL，置于50 mL容量瓶中，依 2.3 项下方法依次加入显色剂，在508 nm 测定其吸光度，重复测定3次，以吸光度平均值根据回归方程计算风车子黄酮含量。

结论与讨论

风车子中黄酮类化合物经超声提取、硝酸铝显色后，可用紫外 - 可见分光光度法在508 nm 下定量测定。线性拟合得回归方程 y=8.652x-8.524E^-4（R²=0.9986），线性范围0.008~0.040 mg/mL，测得赣南风车子中黄酮含量为（58.42±0.19）mg/g(n=3)，该方法操作简便、快捷、高效、结果准确、精密度和稳定性好，杂质干扰少。风车子是江西赣南地区的特色中药材之一，开发利用风车子对促进赣南特色中药材发展具有一定的意义，本文建立了超声提取、紫外 - 可见分光光度法测定风车子总黄酮含量的测定方法，可为开发利用赣南风车子总黄酮提供定量分析方法。

仪器参数

UV-1500PC紫外可见分光光度计

仪器特点

*采用单片微机控制，128*64位液晶显示

*宽大的液晶显示器可显示多组数据

*巨大的内存空间，可存储多组数据和曲线

*自动调0、调100%功能

*波长自动调节

*光源自动切换，滤色片自动切换

*宽大样品池（5mm～100mm）

*具有最多十点标样建标准曲线测量功能

*可通过直接输入K、B因子建立标准曲线进行定量测量

*可直接输入标样和对应浓度值建立标准曲线进行定量测量

*可断电保存测量设置的标准曲线参数

*配备通用并行打印接口，可打印标题栏、测量数据、曲线参数、曲线标准样品点和曲线

*配USB接口

*可通过PC软件控制实现光谱扫描等更精确和灵活的测量要求

技术指标及基本参数

*波长范围： 190～1100nm

*光谱带宽： 2nm

*波长准确度：±0.5nm

*波长重现性：≤0.2nm

*透射比准确度: ±0.3% τ

*透射比重复性：0.15% τ

*杂散光：≤0.05% τ (220nm NaI，340nm NaNO2)

*稳定性： 0.001A/h（500nm预热后）

*测光方式：透过率、吸光度、浓度、能量

*波长调节：自动调节

*光度范围： -0.3～3A

*显示方式： 128*64液晶

*检测器：进口硅光二极管

*光源：进口氘灯，进口钨灯

*电源： AC 220V/50Hz或110V/60Hz

*功率： 120W

*仪器尺寸：480×350×220mm

*主机净重： 15Kg

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上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。