土壤磷酸酶的分光法测定方案
土壤磷酸酶的分光法测定方案
引言
磷酸酶能酶促有机磷化合物的水解。试验表明，土壤微生物对于土壤含磷有机物的矿化起着主要的作用;某些高等植物的根系也有磷酸酶活性。土壤的磷酸酶活性可以表征土壤的肥力状况（特别是磷的状况)。
原理
土壤磷酸酶活性的测定常用各种磷酸酯作为基质。应用得最多的是酚酞磷酸酯、苯磷酸酯、甘油磷酸酯、a-或B-萘磷酸酯和p-硝基苯磷酸酯等的水溶性钠盐。当它们被酶促水解时，能析出无机磷和基质的有机基团。因此磷酸酶活性的测定时测定基质水解后的无机磷或酚的部分。这里介绍的方法是测定基质水解时生成的酚量。该法可用于测定各种磷酸酶的活性:碱性磷酸酶（用PH10的硼酸盐缓冲液)，中性磷酸酶（用PH7.0的柠檬酸盐缓冲液)，酸性磷酸酶（用PH5.0的乙酸盐缓冲液)
仪器及试剂
1)甲苯
2)0.5%磷酸苯二钠
3）硼酸盐缓冲液（PH9.6与PH10.0):称取12.404g硼酸(H,BO;）溶于700ml去离子水，
用稀NaOH溶液调节至PH10.0，用去离子水稀释至1000ml
4)氯代二溴对苯酮亚胺试剂:取0.125g 2,6-二溴苯酮氯酰亚胺，用10ml 96%的乙醇溶解，贮于棕色瓶中，存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。
5）标准溶液:(a）母液: 1g 酚溶于蒸馏水中，并稀释至1000ml，溶液保存在暗色瓶中;
(b）工作液: 10ml溶液（a）稀释至1000ml ( 1ml含10ug酚>
6)0.3%硫酸铝溶液
标准曲线绘制
取1，3，5，7，9，11和 13ml酚工作液(b)，置于50ml容量瓶中，每瓶加入5ml缓冲液和4滴氯代二溴对苯酮亚胺试剂，显色后稀释至刻度，30min后比色测定。以光密度为纵坐标，浓度为横坐标绘成标准曲线。
操作步骤
1）取5g 风干土置于200ml 三角瓶中，用2.5ml甲苯处理2）处理15min后，加入20ml 0.5%磷酸苯二钠
3)将反应混合物置于37℃恒温箱中，培养24h后，在培养液中加100ml 0.3%硫酸铝溶液用致密滤纸过滤。
4)无土对照:不加土样，其他操作与样品实验相同。以检验试剂纯度，整个实验设置一个对照
5)无基质对照:对每个土样，设置以等体积的水代替基质，其他操作与样品实验相同。6）比色程序:
取滤液3ml置于50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线所述方法显色。用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，在分光光度计上于660nm处比色。
结果计算
磷酸酶活性，以24h后1g土壤中释出的酚的毫克数表示:
酚(mg) =a ×8
式中，a——从标准曲线上查得的酚毫克数
8——换算成1g土的系数
以24h后1g土壤中释放出的酚的质量（mg）表示磷酸酶活性。
磷酸酶活性=(a样品一a无土一a无基质）×V×n/m
式中:a样品为样品吸光值由标准曲线求得的酚毫克数;
a无土为无土对照吸光值由标准曲线求得的酚毫克数;
a无基质为无基质对照吸光值由标准曲线求得的酚毫克数;
V为显色液体积;
n为分取倍数，浸出液体积/吸取滤液体积;
m表示烘干土重
仪器参数
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上海美析仪器公司简介
上海美析仪器有限公司(以下简称美析)，是一家具有自主知识产权的高新技术企业，美析的创业理念“科技——因你改变”，并以此为企业宗旨，不断探究、果敢创新。特别是在分析测试仪器领域，不断开发出先进的产品，使美析成为优质仪器资源的供应者。
美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器。
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（美析仪器不仅仅只是一家高新技术认证企业，更通过了CE认证、FCC认证、RoHS认证以及国内多项资质审查认证，并有着多项自行研发的光谱类专利版权等等）
