紫外-可见分光光度法测定番茄红素与酒葡萄原汁中维生素B6

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一、酒葡萄原汁中维生素 B6 的测定

维生素 B6（vitamin B6）又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在体内以磷酸酯的形式存在，是一种水溶性维生素，遇光或碱易破坏，不耐高温。1936年定名为维生素 B6。维生素 B6为无色晶体，易溶于水及乙醇，在酸液中稳定，在碱液中易破坏，吡哆醇耐热，吡哆醛和吡哆胺不耐高温。维生素 B6在酵母菌、肝脏、谷粒、肉、鱼、蛋、豆类及花生中含量较多。维生素B6为人体内某些辅酶的组成成分，参与多种代谢反应，尤其是和氨基酸代谢有密切关系。


紫外-可见分光光度法测定维生素 B6的原理是：采用以0.035mol/L CH3COOH 为介质，测定维生素B6溶液体系简单，操作方便、快速，线性范围宽。


测定和样品处理：取系列标准维生素 B6 溶液于10mL 比色管中，加入0.10mol/L CH3COOH 溶液3.5mL，用水稀释至刻度，摇匀。在紫外-可见分光光度计上，用1cm 比色皿，以试剂空白为参比，于295nm 处测定吸光度，求得工作曲线。取系列标准维生素 B6 片剂或针剂，配制成0.2mg/mL 溶液与标准系列一样进行测定，由工作曲线法即可求得维生素 B6 的含量。


二、番茄红素的测定
番茄红素是一种具有多种生理功能的类胡萝卜素，通常状况下与其他类胡萝卜素同时存在于多种生物体中。在实际研究中，番茄红素的准确测定始终是困扰研究人员的一个难题。


目前的测定方法主要有：
（1）以苏丹红代替番茄红素作为标准品，绘制标准曲线，用以测定番茄红素的含量；
（2）以石油醚或正己烷为溶剂，在472nm 比色测定其吸光度，用摩尔消光系数（    =3450）来计算其中番茄红素的含量；
（3）用高压液相色谱法，通过与标准样品的峰面积比来测定样品中番茄红素的含量。


现有这几种测定番茄红素的方法普遍存在着一定的缺陷：
①不需要标准品，但其系统误差较大，同时又不能排除β-胡萝卜素等其他类胡萝卜素的干扰。
②要求有番茄红素的标准样品，而高纯度的番茄红素本身稳定性很差，不宜长期存放，且价格非常昂贵，日常测定难度很大。另外，高效液相色谱（HPLC）测定又要受到仪器设备及标准样品的限制。


紫外-可见分光光度法测定番茄红素有两种方法：一种方法是采用苏丹红Ⅰ代替番茄红素作为对照品，以485nm 波长下测得的吸光度为纵坐标，苏丹红Ⅰ对照品溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，同时测定待测样品溶液在485nm波长下的吸光度值，通过标准曲线计算样品中番茄红素的含量。国标 GB/T 14215—2008就是利用该法来测定番茄酱中番茄红素的含量。郑丽丽等（2006）利用该方法测定番茄红素片中番茄红素的含量，结果显示该方法简便快捷、稳定准确，适合番茄红素片剂的含量测定。另外一种方法是在472nm 下测定待测样品溶液的吸光度，利用番茄红素的最大摩尔吸光系数的经验数值（E=18.5×104）计算番茄红素的含量。